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向國(guó)內(nèi)進(jìn)口生物科技產(chǎn)品、抗體、試劑盒、細(xì)胞因子

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公司新聞
在WB實(shí)驗(yàn)中為什么需要使用內(nèi)參抗體?
2011-05-26IP屬地 火星168

進(jìn)口內(nèi)參抗體——在WB實(shí)驗(yàn)中為什么需要使用內(nèi)參抗體?
     要檢測(cè)一個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物是否正確,或者比較表達(dá)產(chǎn)物量的相對(duì)變化,首選方法是Western Blot。雖然,順利的時(shí)候Western Blot做起來(lái)很簡(jiǎn)單,可不順的時(shí)候也很令人心煩――做不出結(jié)果啦、假陽(yáng)性啦、結(jié)果出現(xiàn)多條帶啦、到底是一抗有問(wèn)題還是二抗有問(wèn)題啦……畢竟,作為一種有活性的生物大分子,抗體和抗原的反應(yīng)畢竟不象1+1那么明確,而用這種不確定的試劑來(lái)測(cè)定同樣知之甚少的表達(dá)產(chǎn)物,確實(shí)是有一定的不確定性的。所以,嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腤estern Blot實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中要求有良好的參照體系,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析是非常有用的。

      我們知道,要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中,目的蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少,前提條件是等量的細(xì)胞上樣,才有比較的基礎(chǔ)。特別表達(dá)量不高時(shí),上樣量的差別就很可能影響結(jié)果的分析。艾美捷向您推薦使用內(nèi)參抗體來(lái)檢測(cè)您的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),或者校準(zhǔn)您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control),對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins),它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定,在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。在Western Blotting中使用內(nèi)參其實(shí)就是在WB過(guò)程中的另外用內(nèi)參對(duì)應(yīng)的抗體檢測(cè)內(nèi)參,這樣在檢測(cè)目的產(chǎn)物的同時(shí)可以檢測(cè)內(nèi)參的表達(dá),由于內(nèi)參在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定,借助檢測(cè)每個(gè)樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差,這樣半定量的結(jié)果才更為可信。此外使用內(nèi)參可以作為空白對(duì)照,檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

     實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析其實(shí)很簡(jiǎn)單:如果樣品蛋白量有限,只夠進(jìn)行一次電泳轉(zhuǎn)膜實(shí)驗(yàn)時(shí),分別檢測(cè)樣品的內(nèi)參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量,得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對(duì)含量,再用此數(shù)值進(jìn)行樣品間的比較和分析,得到目的蛋白含量在不同樣品間的實(shí)際變化結(jié)果。如果樣品量充分,可以先檢測(cè)內(nèi)參,觀測(cè)樣品間內(nèi)參顯色條帶是否一致,根據(jù)差異大小調(diào)整各樣品的上樣量重新進(jìn)行Western Blotting實(shí)驗(yàn),至內(nèi)參量一致為止;若內(nèi)參一致,即可進(jìn)行不同樣品間目的蛋白表達(dá)變化分析。這樣雖然麻煩一點(diǎn),但是可以保證結(jié)果更有說(shuō)服力,更可信。畢竟我們的實(shí)驗(yàn)是一種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鳌?br />
     常用的蛋白質(zhì)內(nèi)參有GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和細(xì)胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。最近的國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道中使用GAPDH內(nèi)參的較多。艾美捷公司向您推薦進(jìn)口內(nèi)參抗體產(chǎn)品,我們能提供小鼠源、兔源等多種來(lái)源的上述內(nèi)參抗體,并且也能根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求向您推薦不同的產(chǎn)品。與國(guó)產(chǎn)的內(nèi)參抗體相比,同樣是100ul,但是進(jìn)口內(nèi)參具有更高的稀釋比率和效價(jià),因此具有更好的性價(jià)比。大大降低了內(nèi)參的費(fèi)用,性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠、易于保存。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣,請(qǐng)致電027-84454412,或13317111952到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實(shí)驗(yàn)解決方案。
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